図１　本測定法の概要（原理）

２．総コレステロール（TC）はデタミナーTC、TGはデタミナーTGでいずれも協和メデックス社製を使用した。HDLコレステロール（HDL-C）およびLDLコレステロール（LDL-C）は第一化学薬品のコレステストN　HDL、コレステストLDL試薬を使用した。上記の脂質は、日立7180形自動分析機にて測定した。
３．グルコースはアークレイ社のGA-1160分析機、およびグリコヘモグロビンA1Cは東ソー社のHLC-723G7分析機にて測定した。

�W　結果
１．再現性
　３濃度のプール血清をそれぞれ10回連続測定した。いずれもCV1.5〜2.1％と、良好であった（表１）。また日差再現性においても５日間測定しところ、CV23〜3.4％と、良好であった（表２）。
２．直線性（図２）
　高濃度の患者プール血清を用いて希釈系列を作成して測定したところ、約80mg/dlまで良好な直線性が認められた。また高濃度脂質資料（協和メデックスより提供）では約110mg/dlまで良好な直線性が認められた。
３．干渉物質の影響
　干渉チェック（シスメックス）を用いて、干渉物質による影響について検討した。
　図３に示すごとく、添加濃度がアスコルビン酸50mg/dl、遊離型ビリルビン50mg/dl、乳ビはホルマジン濁度2300までそれぞれ影響が認められなかったが、抱合型ビリルビン添加濃度40mg/dlで約５％、ヘモグロビン添加濃度500mg/dlで約６％の負の影響が認められた。

表１　同時再現性	表２　日差再現性
図２　希釈直線性
図３　干渉物質の影響

図４　免疫吸着法との相関

４．相関
　　本法（ｙ）とJIMRO�U（ｘ）との相関を図４に示した。相関係数ｒ＝0.969、ｙ＝0.951ｘ＋0.0443　と高い相関関係を示したが、一部の検体で乖離が認められた。
５．凍結保存による影響
　　�@　２濃度のプール血清とチリトロールを用い、凍結保存（−60℃）による測定値への影響を検討した。なお、プール血清試料は、予め小分けをして凍結し測定時に融解して測定した。図５ａに示すごとく、12日まで測定値に影響はみられなかった。
　　�A　プール血清およびチリトロールを繰り返し凍結融解を行った場合の測定値への影響を検討したところ、凍結融解の２回目から測定値のバラツキが認められた（図５ｂ）。


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図５　連結保存による影響

図６食後高血糖群での血清脂質との比較

６．糖尿病患者の血清脂質
　非糖尿病群と糖尿病群との比較を表３に示した。糖尿病群のRLP-C、TG値が非糖尿病群に比べ有意に高値を示し、HDL-Cは有意に低値を示した。
７．食後高血糖と血清脂質との関係
　糖尿病患者に、採血時に食後の時間を聞き取り、食後２時間を対象として、血糖値が200mg/dl以上の群（高血糖群）と未満の群（非高血糖群）とに分類し、血清脂質の比較を図６ａ−ｃに示した。高血糖群で有意差は認められなかったが、RLP-C、TG、HbA1C値が高値傾向を示した。
Ｖ．考察
　本法におけるRLP-C測定法は、再現性、直線性および共存物質の影響ともにほぼ満足のいく結果であった。−60℃での凍結保存では、少なくとも、12日間まで測定可能であった。また４℃保存では５日間まで測定可能と思われた。本法と免疫吸着法とのあいだに高い相関を示したが、一部の検体で乖離が認められた。これは滝野ら５）も指摘しているように、免疫吸着法によるRLP-Cの測定法では抗ヒトアポB100抗体と抗ヒトアポAI抗体での反応により非結合分画中（レムナント様リポ蛋白）のコレステロール値を測定するのに対し、本法では、レムナントリポ蛋白以外のリポ蛋白を阻害し、可溶化させたレムナントリポ蛋白のコレステロールを直接測定することから、レムナントリポ蛋白に対する免疫吸着法と本測定法との反応性の違いが考えられる。
　糖尿病患群では、RLP-CおよびTG値が高値を示し、HDL-C値が低値であったことから糖尿病における脂質代謝異常を示唆する結果であった（表３）。さらに糖尿病患者では食後高血糖が動脈硬化発症・進展に寄与しているとされ、特に心疾患のリスクが高いことが報告されている６）７）。
　今回のわれわれの検討では、糖尿病患者の食事の量や質など一定条件を考慮して得られたものではないが、食後２時間の血糖値が200mg/dl以上を示した群でRLP-C、TG値が高値傾向を示した。このことから食後高血糖群と脂質代謝異常との関連性が考えられるため、食後高血糖とRLP-Cおよび他の脂質との関係については、今後、詳細に検討する必要があると思われた。

表３　非糖尿病と糖尿病群の血清脂質値

�Y　まとめ
１．本法は、再現性および直線性が良好で従来法とも良好な相関を示した。共存物質の影響では、ヘモグロビンおよびビリルビンにおいて若干の影響が認められたが、ほぼ満足のいく結果であった。
２．糖尿病患者のRLP-C値は非糖尿病患者に比べ高値を示し、食後高血糖においても高値傾向を示したことから、糖尿病におけるRLP-C測定の臨床的有用性が示唆された。
３．本法は前処理操作を必要とせず、直接自動分析装置にて測定が可能なことから有用性が高いと思われた。

文献
１．Mcnamara JR., et al. Remnant-like particle (RLP) cholesterol is an independent cardiovascular disease risk factor in women: results from the Framingham Heart Study. Atherosclerosis 154:229-236 2001.
２．芳野　原、他　糖尿病と脂質代謝異常　Mebio　22：21-33　2005．
３．Nakajima K, et al. A new assay method for the quantification of cholesterol in remnant-like lipoproteins in human serum using monoclonal anti apoB-100 and apoA-Ｉ immunoafinity mixed gels. Clin Chim Acta 223：53-71 1993.
４．宮内一人、他.界面活性剤を用いたレムナントリポ蛋白コレステロール（RLP-C）直接測定法の開発．臨床病理　53（補冊）：325　2005．
５．滝野　豊、他．レムナント様リポ蛋白コレステロール「RLP-C」の新しい測定試薬「メタボリードRem-C」の基礎的検討および有用性の評価．医学と薬学　56：269-276　2006．
６．Tominaga M., et al. Impaired glucose tolerance is a risk factor for cardiovascular disease, but not impaired fasting glucose. The Funagata Diabetes Study Diabetes Care 22：920-924 1999.
７．DECODE　Study Group Glucose tolerance and cardiovascular mortality. Comparison of fasting and 2-hour diagnostic criteria Arch Intern Med 161：397-404 2001.